NGAL基因3′端序列转录调控元件的克隆与鉴定

目的：将不同长度的NGAL基因3′端序列(包括外显子、内含子和部分3′侧翼非翻译序列)克隆到pGL3-Promoter(pGLP)载体中，通过检测报告基因荧光素酶活力，确认NGAL3′端序列中是否含有增强子或抑制子元件。方法：应用PCR技术从SHEEC细胞基因组DNA中扩增出不同长度的NGAL基因片段F5(1880bD)和F7(826bp)，将其克隆到pGEM-T easy载体，并测序验证；再亚克隆到pGL3-Pro-moter载体中，获得pGLP-F5和pGLP-F7表迭栽体；将pGLP-F5和pGLP-F7载体分别与pRL-TK载体共转染HeLa、EC109和Vero细胞，通过检测相对荧光素酶活力，确认这些NGAL基因片段中是否含有增强子元件。结果：我们成功构建了pGLP-F5和pGLPF7重组载体。Hela、EC109和Vero转染细胞与pGL3-Promoter相比，酶活力未表现出明显的增强或减弱。结论：在本研究的实验条件下，NGAL基因F5和F7片段内潜在的顺式作用元件并没有发挥作用，或作用不明显。