传代培养密度对人间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

背景：组织工程技术的快速发展为骨缺损完全再生修复带来了新的希望，种子细胞的快速扩增是其中的关键问题之一。 目的：观察人间充质干细胞传代培养时，细胞种植密度对间充质干细胞增殖及成骨诱导分化影响。 设计：重复测量设计。 单位：解放军第三军医大学细胞培养室和检测分析室。 对象：实验于2003-01／2004-03在解放军第三军医大学的创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室完成。从5例男性健康志愿者髂骨骨髓中分离扩增的干细胞。 方法：将第2代间充质干细胞以8&;#215;10^3／cm^2，3&;#215;10^3／cm^2，8&;#215;10^2／cm^2密度接种。分析其生长曲线，并扩增培养18d，记录细胞扩增数量，再分析扩增后细胞的生长曲线和成骨诱导能力。 主要观察指标：①不同种植密度下细胞生长曲线。②碱性磷酸酶染色和骨钙素的免疫组化染色结果。 结果：人骨髓间充质干细胞阴性表达碱性磷酸酶、CD34；在8&;#215;10^3／cm^2种植密度下，细胞倍增时间40h，18d后细胞数量扩增（51&;#177;13）倍；在3&;#215;10^3／cm^2种植密度下，细胞扩增（28&;#177;6）倍；在8&;#215;10^2／cm^2种植密度下，细胞总数仅增加（5&;#177;3）倍。在低密度下获得的细胞增殖能力强于高密度组，两组细胞均具有成骨诱导能力。 结论：种植密度对间充质干细胞增殖有明显影响，快速扩增间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞，宜选择8&;#215;10^3／cm^2种植密度。

Effects of cell density on proliferation and osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells during subculturing in vitro