CCAAT增强子结合蛋白α对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响

目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在体内和体外对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响及其可能机制.方法 将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株为转染组;以转染pEGFP空载质粒HL60细胞为空载体组;未处理的HL60细胞为对照组.瑞氏染色观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析凋亡;RT-PCR及免疫印迹法(Western blot)检测c-myc基因的表达.20只BALB/c裸鼠按完全随机法分为3组:转染组7只、空载体组7只、对照组6只.将3组细胞分别皮下注射相应各组小鼠形成皮下瘤,20 d后处死小鼠,测量肿瘤质量及大小,TUNEL法检测皮下瘤组织细胞凋亡率.结果 筛选到C/EBPα基因稳定表达的细胞株pEGFP-C/EBPα-HL60,细胞出现明显分化.对照组、空载体组和转染组细胞的凋亡率分别为(5.4±1.4)%、(5.0±1.3)%、(21.9±4.5)%,转染组细胞的凋亡率显著高于对照组和空载体组(均P＜0.05).RT-PCR及免疫印迹显示C/EBPα明显抑制c-myc mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).对照组、空载体组和转染组细胞接种小鼠形成皮下瘤,其质量分别为(5.35±1.12)g、(5.12±1.31)g和(3.26±0.72)g,瘤体大小分别为(25±4)mm、(18±3)mm和(11±2)mm,转染组瘤体质量及瘤体大小明显低于对照组和空载体组(均P＜0.05).与对照组和空载体组比较,转染组皮下瘤组织细胞凋亡率明显增加(均P＜0.05).结论 C/EBPα在HL60细胞中具有促进细胞凋亡和抑制细胞增殖的能力,显示C/EBPα在急性粒细胞白血病中是一种肿瘤抑制因子.