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| pLEGFP-N1-基质细胞衍生因子-1α的构建与目的基因在恒河猴骨髓基质细胞内的稳定表达 | |
| 作者姓名： | 李三清 徐强 刘柯 许百男 潘力 饶军华 |
| 作者单位： | 1. 中国人民解放军第457医院神经外科,武汉,430012 2. 解放军总医院神经外科 3. 南方医科大学附属花都医院神经外科 4. 复旦大学华山医院神经外科 5. 广东省昆虫研究所 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，中国博士后科学基金 |
| 摘 要： | 目的 构建携带人基质细胞衍生因子(SDF)1α基因的反转录病毒真核表达载体pLEGFP-N1-SDF-1α,转染恒河猴骨髓基质细胞(BMSC),观察外源性SDF-1α和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在BMSC中的表达情况.方法 应用基因重组技术,从pBudce4.1-SDF-1α获得SDF-1α基因片段,重组到pLEGFP-N1真核表达载体上.pLEGFP-N1-SDF-1α经病毒包装,转染至恒河猴BMSC,用Western免疫印迹和免疫细胞化学检测表达情况.结果 酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入基因片段的正确性.BMSC转染pLEGFP-N1-SDF-1α后,在荧光显微镜下发出绿色荧光.western免疫印迹和免疫细胞化学证实SDF-1α在细胞内有效表达.结论 成功构建本研究pLEGFP-N1-SDF-1α,经病毒包装转染至恒河猴BMSC,SDF-1α和EGFP基因在BMSC内有效表达.为BMSC-SDF-1α-EGFP工程细胞自体移植治疗相关疾病提供了依据. |
| 关 键 词： | 基质细胞衍生因子-1α 绿色荧光蛋白质类 骨髓基质细胞 恒河猴 基因治疗 |
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