TAT-Apoptin对肿瘤细胞的促凋亡作用

目的构建TAT-Apoptin的原核表达载体,表达并纯化凋亡素蛋白,检测其对多种肿瘤细胞的抑制作用。方法利用PCR合成TAT-Apoptin序列,并将序列连接到pET-28b(+)原核表达载体的多克隆位点上,构建pET-28b-Apoptin载体,然后将重组载体转入E.coli BL21宿主菌,IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和柱进行纯化获得目的蛋白。将TAT-Apoptin加入到肿瘤细胞中,用CCK8法检测TAT-Apoptin对肿瘤细胞的抑制作用。结果成功构建pET-28b-Apoptin质粒,IPTG诱导宿主菌表达TAT-Apoptin,经SDS-PAGE分析,在15×10~3Mr处发现目的蛋白条带,与预期一致。镜检、CCK8法检测发现纯化的TAT-Apoptin对肿瘤细胞A549、MDA-MB-231、SKB-R3均具有一定的促凋亡作用。结论 TAT-Apoptin原核表达载体构建完成,表达的TAT-Apoptin对肿瘤细胞生长有促凋亡作用。