| 14-3-3σ逆转录病毒载体的构建及稳定转染HaCat细胞系的建立 |
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| 作者姓名： | 周美娟 丁振华 |
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| 作者单位： | 南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系,广州市,510515 |
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| 基金项目： | 医科大学公共卫生与热带医学学院院长基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系.方法:以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内进行扩增,刷选阳性克隆,酶切和测序验证后,转染293vr细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒栽体.将逆转录病毒载体感染HaCat细胞后Western、实时荧光定量PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pLEGFP-N1-14-3-3σ;稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.Western和实时荧光定量PCR法表明14-3-3σ表达明显增强.结论:成功构建了14-3-3σ逆转录病毒载体,并构建了英稳定转染的HaCat细胞系.
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| 关 键 词： | 逆转录病毒 14-3-3σ 稳定转染的 HaCat 细胞系 |
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