| 肠出血性大肠杆菌O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达 |
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| 引用本文： | 易勇,邹全明,程建平,毛旭虎,曾明,朱永红,童文德.肠出血性大肠杆菌O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达[J].中华微生物学和免疫学杂志,2005,25(2):142-145. |
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| 作者姓名： | 易勇 邹全明 程建平 毛旭虎 曾明 朱永红 童文德 |
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| 作者单位： | 1. 400038,重庆,第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室
2. 中国药品生物制品检定所 |
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| 摘 要： | 目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 5 7∶H7紧密黏附素 (intimin)免疫保护性片段 (intiminC30 0 )。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 5 7∶H7基因组扩增紧密黏附素及其免疫保护性片段的编码基因eae与eaeC30 0 ,T A克隆后构建原核表达质粒pET 2 8a(+) eae及pET 2 8a(+) eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测。结果 PCR法自EHECO1 5 7∶H7基因组扩增出了约 2 80 0bp和 90 0bp的目的片段 ;原核表达质粒pET 2 8a(+) eae及pET 2 8a(+) eaeC30 0经酶切及测序鉴定与预期序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5 %和 30 %;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 96× 1 0 3和 35× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达。结论 EHECO1 5 7∶H7紧密黏附素免疫保护性片段经基因克隆后获得了较高的表达量 ,为进一步的生物学性质及免疫学特性研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肠出血性大肠杆菌O157：H7 免疫保护性 基因克隆 黏附素 片段 BL21（DE3） 原核表达质粒 E．coli 基因组扩增 EHEC 相对分子质量 PCR法 PAGE T-A克隆 蛋白表达率 生物学性质 克隆表达 设计引物 编码基因 诱导表达 特性研究 |
| 修稿时间： | 2004年4月12日 |
Gene cloning and prokaryotic expression of intimin and intiminC300 from EHEC O157∶H7 |
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| Yi Yong,ZOU Quan-ming,CHENG Jian-ping,MAO Xu-hu,ZENG Ming,ZHU Yong-hong,TONG Wen-de.Gene cloning and prokaryotic expression of intimin and intiminC300 from EHEC O157∶H7[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2005,25(2):142-145. |
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| Authors: | Yi Yong ZOU Quan-ming CHENG Jian-ping MAO Xu-hu ZENG Ming ZHU Yong-hong TONG Wen-de |
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