眼镜蛇神经毒素分离纯化及其经大鼠直肠给药吸收的实验研究

目的 利用色谱技术从眼镜蛇粗毒中分离纯化神经毒素，探索神经毒素经大鼠直肠途径给药后的吸收情况和镇痛活性。方法 通过CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱和Sephadex G-50凝胶过滤色谱两步法分离纯化神经毒素。采用免疫组织化学技术观察神经毒素在大鼠直肠组织中的分布。利用Shotgun质谱技术和数据库检测大鼠血浆神经毒素片段。利用HE染色观察神经毒素对大鼠直肠组织结构的影响。利用醋酸扭体法测定神经毒素直肠给药后镇痛活性。结果 通过色谱分离纯化得到电泳纯的神经毒素。神经毒素直肠给药3 h后直肠黏膜组织内神经毒素分布明显，阳性面积比率、平均光密度值、H-SCORE值与对照组相比差异明显(P<0.01)。质谱检测到大鼠血浆中神经毒素有关片段。HE染色表明神经毒素对大鼠直肠组织没有损伤，组织结构无明显病理变化。醋酸扭体法测定小鼠直肠给药神经毒素3 h后扭体抑制率达50%,提示具有镇痛活性。结论 眼镜蛇神经毒素可以通过直肠吸收入血并且发挥镇痛作用，为后续研究眼镜蛇神经毒素直肠给药制剂提供实验依据。