| 远志细胞色素P450家族PtCYP72A546克隆、亚细胞定位与表达分析 |
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| 引用本文： | 罗瑶,净易尧,胡本祥,杨冰月,姬海月,颜永刚,张岗,赵璠,彭亮. 远志细胞色素P450家族PtCYP72A546克隆、亚细胞定位与表达分析[J]. 中草药, 2024, 55(3): 919-927 |
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| 作者姓名： | 罗瑶 净易尧 胡本祥 杨冰月 姬海月 颜永刚 张岗 赵璠 彭亮 |
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| 作者单位： | 陕西中医药大学 药学院/陕西省秦岭中草药应用开发工程技术研究中心/"秦药"研发重点实验室, 陕西 咸阳 712046;陕西中医药大学 药学院/陕西省秦岭中草药应用开发工程技术研究中心/"秦药"研发重点实验室, 陕西 咸阳 712046;陕西国际商贸学院, 陕西 咸阳 712046;榆林市第五医院, 陕西 榆林 719000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（82003899）;陕西省科技厅社发攻关一般项目（2021SF-364,2023-YBSF-036）;陕西中医药大学“秦药”品质评价及资源开发学科创新团队项目（2019-QN01）;陕西省教育厅一般专项（22JK0279） |
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| 摘 要： | 目的 旨在克隆获得远志Polygala tenuifolia 细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）基因CYP72A546的基因开放阅读框（open reading frame,ORF）,并对其理化特性、系统进化关系、组织表达、激素与非生物胁迫下的表达等展开分析。方法 基于远志全长转录组文库筛选并克隆远志细胞色素P450家族基因PtCYP72A546,通过生物信息学在线软件分析其编码的氨基酸序列,预测蛋白理化性质、结构域等分子特征;利用MEGA11分析进化关系,并采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测不同组织、激素及非生物胁迫的相对表达量。结果 从远志中成功克隆得到远志细胞色素P450家族基因PtCYP72A546,其ORF序列全长共计1 560 bp,编码519个氨基酸,相对分子质量为59 770,系疏水性稳定蛋白,含有1个保守结构域,不具有跨膜结构,二级结构主要为α-螺旋和无规卷曲,亚细胞定位分析表明PtCYP72A546-GFP融合蛋白定位于内质网。qPCR结果显示,远志根中CYP72A546表达量显著高于茎和叶片;200 μmol/L脱落酸（abscisic acid,ABA）和200 μmol/L壳聚糖（chitosan,CHT）处理下,CYP72A546均于12 h达峰值,分别为空白对照的7.45倍和5.49倍;在非生物（干旱、盐）胁迫处理下,CYP72A546的表达均先受抑制（6 h）,再上调后缓慢下降。结论 通过对远志CYP72A546基因的克隆、鉴定与分析,为深入研究其在远志三萜皂苷合成途径的功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 远志 细胞色素P450 亚细胞定位 生物信息学分析 基因表达 |
| 收稿时间： | 2023-08-09 |
Cloning, subcellular localization and expression analysis of CYP72A546 gene of cytochrome P450 family in Polygala tenuifolia |
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| LUO Yao,JING Yiyao,HU Benxiang,YANG Bingyue,JI Haiyue,YAN Yonggang,ZHANG Gang,ZHAO Fan,PENG Liang. Cloning, subcellular localization and expression analysis of CYP72A546 gene of cytochrome P450 family in Polygala tenuifolia[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2024, 55(3): 919-927 |
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| Authors: | LUO Yao JING Yiyao HU Benxiang YANG Bingyue JI Haiyue YAN Yonggang ZHANG Gang ZHAO Fan PENG Liang |
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| Affiliation: | College of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine/Shaanxi Engineering Research Center for Application and Development of Chinese Medicine in Qinling Mountains/Key Laboratory of "Qin Medicine" Research and Development, Xianyang 712046, China;College of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine/Shaanxi Engineering Research Center for Application and Development of Chinese Medicine in Qinling Mountains/Key Laboratory of "Qin Medicine" Research and Development, Xianyang 712046, China;Shaanxi Institute of International Trade & Commerce, Xianyang 712046, China;Yulin No.5 Hospital, Yulin 719000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Polygala tenuifolia Willd. cytochrome P450 subcellular localization bioinformatics analysis gene expression |
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