基于AMPK信号通路探讨黄芪甲苷对db/db小鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的作用机制

目的 基于网络药理学和实验验证研究黄芪甲苷（ASⅣ）对db/db小鼠2型糖尿病（T2DM）合并非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的作用机制。方法 通过随机将24只db/db小鼠分为4组：模型组、二甲双胍组、黄芪甲苷低、高剂量组。采用6只C57小鼠作为空白组。黄芪甲苷低、高剂量组分别予黄芪甲苷0.015、0.030 g·kg^-1灌胃，二甲双胍组予0.067 g·kg^-1灌胃，空白组和模型组予等体积蒸馏水灌胃。灌胃结束后，检测小鼠空腹血糖（FBG），进行口服葡萄糖耐量试验，检测血清血脂水平及肝组织病理情况。通过网络药理学预测黄芪甲苷治疗T2DM合并NAFLD的作用靶点及富集通路，并采用分子生物学技术验证其主要相关富集通路；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织AMPK、p-AMPK、甾醇调节元件结合蛋白-1（SREBP-1）、脂肪酸合成酶（FAS）蛋白表达。结果 与空白组比较，经ASⅣ治疗的小鼠体质量、肝质量系数、空腹血糖、血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平降低（P<0.05，P<0.01）。肝组织的病理学显示脂质蓄积情况明显改善，影像学结果显示经黄芪甲苷治疗后，脂肪肝的程度减轻。网络药理学预测结果表明血管内皮生长因子α（VEGFA），半乳糖凝集素3（LGALS3），蛋白激酶B2（Akt2），含Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1（ROCK1），蛋白激酶B1（Akt1），信号传导及转录激活蛋白（STAT3），间质表皮转化因子（MET）是“药物-疾病”中的关键靶点，京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集的结果显示AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）信号通路与T2DM合并NAFLD密切相关。Western blot结果显示，与空白组比较，模型组中p-AMPK/AMPK表达水平明显下调，SREBP-1、FAS蛋白表达水平明显上调（P<0.01）；与模型组比较，二甲双胍组、黄芪甲苷高剂量组p-AMPK/AMPK表达水平明显上调，SREBP-1、FAS蛋白表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。结论 黄芪甲苷通过激活AMPK信号通路来调控脂质类蛋白的表达，从而改善脂质代谢。