基于SIRT1和PI3K/Akt信号通路探讨黄芪甲苷对慢性难愈性创面大鼠模型修复愈合的影响及作用机制

目的 探讨黄芪甲苷对慢性难愈性创面修复愈合的促进作用及其机制。方法 60只雄性SD大鼠背部构建全层皮肤缺损创面，除正常组外，其余大鼠构建难愈性创面模型，随机分为模型组、黄芪甲苷低、高剂量组、黄芪甲苷+ LY294002［磷酸肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂］组和黄芪甲苷+EX527［沉默调节蛋白1（SIRT1）抑制剂）］组。观察各组大鼠创面造模后第2、4、6、8天的伤口面积占比；免疫荧光检测创面组织Ⅰ型胶原α1（COL1A1）和α-肌动蛋白（α-SMA）表达；苏木素-伊红（HE）染色检测创面组织病理结构；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测创面炎症因子mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测创面SIRT1/核转录因子（NF）-κB和PI3K/蛋白激酶B（Akt）信号通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，黄芪甲苷低、高剂量组大鼠术后伤口面积占比均随时间逐渐降低，且黄芪甲苷高剂量组疗效更佳。与正常组比较，模型组创面组织COL1A1荧光强度降低而α-SMA表达升高；上皮组织破损严重，厚度增加，可见大量炎性细胞浸润；肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA表达升高；NF-κB p65、磷酸化（p）-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白表达升高，而SIRT1表达降低（P<0.05）。与模型组比较，黄芪甲苷治疗后COL1A1和α-SMA荧光强度增高；上皮细胞数量增多，厚度降低，炎性细胞减少，胶原数量增多；TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS的mRNA表达降低；NF-κB p65、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白表达降低，SIRT1升高，且高剂量组效果更佳（P<0.05）。与黄芪甲苷高剂量组比较，LY294002和EX527抑制PI3K/Akt和SIRT1通路可阻止黄芪甲苷对慢性难愈性创面的治疗效力。结论 黄芪甲苷外用对大鼠慢性难愈性创面愈合有明显促进作用，其机制可能与激活PI3K/Akt通路和SIRT1/NF-κB通路有关。

Exploring Effect and Mechanism of Astragaloside on Repair and Healing in Chronic Non-healing Wound Rat Model Based on SIRT1 and PI3K/Akt Signaling Pathway