祛湿活血方作用非酒精性脂肪肝肝细胞转录组分析及验证

目的 获取和发掘祛湿活血方作用于非酒精性脂肪肝（NAFLD）肝细胞后的转录组数据库和肝细胞炎症环境相关细胞焦亡差异表达基因。方法 研究用棕榈酸诱导的人肝细胞系L-02建立NAFLD的细胞模型，采用去除核糖体RNA的转录组测序法（Ribo-Zero RNA-Seq）对中药祛湿活血方处理的L-02细胞模型进行转录组测序，并进行系统的生物信息学分析，筛选出与炎症环境相关细胞焦亡的差异表达基因。然后通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和蛋白免疫印迹（Western Blot）验证核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及其诱导的肝细胞焦亡相关分子的表达。结果 本次测序分析共获得3 000多个显著性差异表达的基因，其中差异基因的数量在空白处理组/祛湿活血方组最多，1 435个上调，658个下调。差异表达基因主要富集在炎症信号、细胞命运和脂肪代谢等相关通路，NLRP3、消皮素D(GSDMD)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)等焦亡相关基因被筛选出。qRT-PCR、Western Blot等验证结果表明，祛湿活血方处理肝细胞可以降低以上分子在基因和蛋白水平的表达。结论 祛湿活血方可调控炎症相关焦亡信号分子NLRP3、GSDMD和Caspase-1基因及蛋白的表达，从而降低炎症反应，抑制肝细胞焦亡，这可能是祛湿活血方治疗NAFLD的一个有效靶点。

Transcriptome Analysis and Verification of the Effect of Qushi Huoxue Recipe on Non-alcoholic Fatty Liver Cells