人共刺激分子B7-H3表达载体的构建及表达检测

目的：B7-H3作为B7家族的最新成员，其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达，B7-H3对CD4＋和CD8＋细胞的生成均具有增加作用，并可选择性增加IFN-γ的生成。为将B7-H3基因转染入舌鳞癌细胞Tea8113中制备瘤苗。克隆人共刺激分子B7-H3基因，构建其真核表达载体，并检测B7-H3基因在Tea8113中的表达。方法：从淋巴细胞中提取RNA，用RT—PCR方法将B7-H3的编码序列cDNA扩增。然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP—C1中，构建成最终的表达载体pEGFP—C1-B7-H3。运用脂质体方法将pEGFP—C1-B7-H3转染Tea8113细胞．转染24h后．荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，RT—PCR检测B7-H3在该细胞中的表达。结果：从淋巴细胞中提取的RNA质量较好，经RT—PCR扩增出目的基因B7-H3，其全长大小为951bp。测序鉴定，该序列与GenBank中序列相同。转染pEGFP—C1-B7-H3载体的靶细胞Tea8113中，荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白，RT—PCR方法检测到目的基因B7-H3的-个215bp大小的eDNA扩增产物。结论：酶切及RT—PCR证实成功构建人B7-H3的真核表达载体pEGFP—C1-B7-H3，将该载体转染到Tea8113中，RT—PCR鉴定B7-H3基因在该细胞中表达。

Construction and detection of the expression vector with human costimulatory molecules B7-H3