MTB39A蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定

目的 旨在获得具有免疫原性的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)MTB39A蛋白。方法 选择H37Rv株中的MTB39A(Rv1196)基因序列(GenBank ID:NC＿000962.3)克隆至pFastBac-Dual载体pH启动子下游并进行鉴定。将鉴定正确的重组质粒转化入感受态细胞DH10 Bac中进行蓝白斑筛选，获得的重组杆状质粒Bacmid利用脂质体转染至昆虫细胞Sf9中进行病毒拯救。转染后96 h,收取上清病毒液，盲传3代后采用直接和间接免疫荧光法及Western blot检测MTB39A蛋白的表达。结果 重组质粒pFastBac-dual-MTB39A-mCherry和重组Bacmid构建正确，Western blot检测显示MTB39A蛋白能被His-tag抗体识别，IFA鉴定出现特异性红色荧光。结论 通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达具有反应原性的MTB39A蛋白，为新型结核疫苗候选物和潜在特异性诊断标志物的研制奠定了实验基础。