健脾养正消癥汤通过抑制有氧糖酵解对胃癌HGC-27细胞增殖及干细胞特性的影响

目的 观察健脾养正消癥汤通过抑制有氧糖酵解过程而对人胃癌细胞HGC-27增殖过程及干细胞特性的影响，并探讨其具体机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法测定健脾养正消癥汤（0.25、0.5、1、2、4、8、16、32 g·L^-1）处理胃癌细胞HGC-27的存活率及化疗敏感性的变化；细胞克隆形成实验检测健脾养正消癥汤（2、4、8 g·L^-1）对细胞克隆形成能力的影响；葡萄糖检测试剂盒和乳酸测定试剂盒检测健脾养正消癥汤处理后胃癌细胞有氧糖酵解水平的变化；流式细胞术检测胃癌HGC-27细胞中干细胞亚群的比例；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测胃癌细胞中乳酸脱氢酶（LDH）及己糖激酶2（HK2）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、丙酮酸激酶同工酶M2（PKM2）等糖酵解相关蛋白的表达及八聚体结合转录因子4（OCT4）、SRY-box转录因子2（SOX2）、Nanog等干细胞特性相关蛋白的表达。结果 MTT比色法结果表明，与空白组比较，健脾养正消癥汤（0.5、1、2、4、8、16、32 g·L^-1）组能够抑制胃癌HCG-27细胞活力（P<0.05，P<0.01），其半数抑制浓度（IC₅₀）为4.83 g·L^-1，且健脾养正消癥汤能够提高胃癌HGC-27细胞对顺铂化疗的敏感性；克隆形成实验表明，与空白组比较，健脾养正消癥汤（2、4、8 g·L^-1）均能显著减少胃癌HGC-27细胞克隆形成数（P<0.01），且呈现浓度依赖性；流式细胞术表明，与空白组比较，健脾养正消癥汤（2、4、8 g·L^-1）作用后细胞的CD44⁺CD24⁺ALDH⁺细胞亚群比例率明显降低（P<0.05）；葡萄糖检测和乳酸检测表明，与空白组比较，健脾养正消癥汤（2、4、8 g·L^-1）能有效抑制胃癌细胞的葡萄糖摄取和乳酸生成（P<0.01）；Western blot表明，与空白组比较，健脾养正消癥汤（2、4、8 g·L^-1）能下调SOX2、Nanog、OCT4等干性相关蛋白及PKM2、LDH、GLUT1、HK2等有氧糖酵解途径相关蛋白的水平（P<0.05，P<0.01），并呈浓度依赖性。结论 健脾养正消癥汤对胃癌细胞增殖具有明显抑制作用，且能够降低胃癌干细胞特性，其作用机制可能与干预胃癌的糖代谢通路—有氧糖酵解有关。

Jianpi Yangzheng Xiaozheng Decoction Affect Proliferation and Stemness of Gastric Cancer HGC-27 Cells by Inhibiting Aerobic Glycolysis