| 抗人DR5单克隆功能抗体mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase路径机制研究 |
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| 引用本文： | 杜耀武,刘广超,王靖,赵粤萍,李淑莲,蒋祺,蔡静,马远方.抗人DR5单克隆功能抗体mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase路径机制研究[J].中国免疫学杂志,2009,25(1). |
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| 作者姓名： | 杜耀武 刘广超 王靖 赵粤萍 李淑莲 蒋祺 蔡静 马远方 |
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| 作者单位： | 河南大学免疫学研究所,河南大学医学院,河南大学天然药物与免疫工程重点实验室,开封,475001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，河南省杰出科研人才创新工程项目 |
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| 摘 要： | 目的:探讨抗人死亡受体5(DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞诱导凋亡的Caspase分子机制.方法:琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6作用后Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞生长抑制作用的剂量.效果关系;Annexin V-FTTC/PI双染流式细胞术定量分析mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用;观察Caspase-10、9、8、3等抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspaw-10、9、8、3、Bid(tbid)、Cyto c等活化裂解的情况.结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的生长抑制作用且呈量-效关系,Annexin V-FTTC/PI双染流式细胞术检测显示,mDRA-6在2.0 μg/ml浓度作用Jurkat细胞0.23、0.5、1、2小时,其凋亡率分别为16.17%、28.25%、69.23%、78.23%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA.6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.85%,Caspase-3和Cas-pase-9抑制剂的抑制率分别为54.20%、8.74%,而Caspase-lO的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、3、9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,Bid激活降解为tbid,Cyto c大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现.结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是激活了死亡受体信号传导途径上游的Caspase-8引起的,该细胞凋亡机制涉及Caspase-3、Caspase-9及Bid(tbid)、Cyto c等分子,而同样是凋亡的上游信号Caspase-10没有参与此凋亡过程.本研究为mDRA-6的人源化改造及后续的实验研究打下了基础.
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| 关 键 词： | 死亡受体5 功能性抗体 Jurkat细胞 细胞凋亡 分子机制 |
The Caspase-dependent mechanisms are involved in the induction of apoptosis of Jurkat cells by a novel agonist anti-human DR5 monoclonal antibody |
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| DU Yao-Wu,LIU Guang-Chao,WANG Jing,ZHAO Yue-Ping,LI Shu-Lian,JIANG Qi,CAI Jing,MA Yuan-Fang.The Caspase-dependent mechanisms are involved in the induction of apoptosis of Jurkat cells by a novel agonist anti-human DR5 monoclonal antibody[J].Chinese Journal of Immunology,2009,25(1). |
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| Authors: | DU Yao-Wu LIU Guang-Chao WANG Jing ZHAO Yue-Ping LI Shu-Lian JIANG Qi CAI Jing MA Yuan-Fang |
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