| 结核分枝杆菌RpfA蛋白的表达纯化与鉴定 |
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| 引用本文： | 高辉,柏银兰,王丽梅,徐志凯,薛莹. 结核分枝杆菌RpfA蛋白的表达纯化与鉴定[J]. 医学争鸣, 2006, 27(18): 1633-1636 |
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| 作者姓名： | 高辉 柏银兰 王丽梅 徐志凯 薛莹 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的:表达和纯化RpfA融合蛋白.方法:将含有RpfA基因片段的质粒用NdeI与BamHⅠ双酶切,然后将目的基因片段克隆入pcDNA3.1 载体构建重组载体pcDNA3.1 -RpfA,测序正确后再将目的基因片段亚克隆入pET19b原核表达载体并转化E.coli DE3,IPTG诱导表达融合蛋白,Western blot鉴定融合蛋白.在变性条件下Ni2 -NTA 亲和色谱柱纯化目的融合蛋白.结果:目的基因片段测序与Genbank报道一致(切去了5'端99 bp).SDS-PAGE显示,在Mr约为80 ku处有表达条带,Western blot鉴定为(His)6融合蛋白,并与小鼠抗Rv1884和抗Rv2389免疫血清有交叉反应.可溶性分析发现融合蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化得到了融合有6个组氨酸残基的RpfA融合蛋白.结论:成功构建了pET19b-RpfA表达载体,并在E.coli DE3中高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白.
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| 关 键 词： | RpfA 表达 纯化 分枝杆菌 结核 |
| 文章编号： | 1000-2790(2006)18-1633-04 |
| 收稿时间： | 2006-04-13 |
| 修稿时间： | 2006-06-20 |
Expression, purification and identification of Mycobacterium tuberculosis RpfA |
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| GAO Hui,BAI Yin-Lan,WANG Li-Mei,XU Zhi-Kai,XUE Ying. Expression, purification and identification of Mycobacterium tuberculosis RpfA[J]. Negative, 2006, 27(18): 1633-1636 |
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| Authors: | GAO Hui BAI Yin-Lan WANG Li-Mei XU Zhi-Kai XUE Ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RpfA |
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