基于脂肪细胞自噬探讨温胆汤干预肥胖痰湿证炎症状态的作用机制

目的观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠肾周脂肪组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)等相关炎症细胞因子,对自噬活性标志物B细胞淋巴瘤2结合蛋白-1(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链(LC3) mRNA与蛋白水平表达,以及对脂肪细胞超微结构与自噬状态变化的影响,探讨温胆汤干预肥胖痰湿证炎症状态的作用机制。方法选用清洁级60 g左右雄性SD大鼠100只,随机分成造模组(70只)和空白组(30只),空白组采用普通饲料喂养,造模组采用高脂饲料喂养,持续喂养6周,借助文献方法制作肥胖痰湿证大鼠模型。造模成功后,按照体质量依序淘汰过轻者,共遴选出16只肥胖大鼠,随机分为模型组、温胆汤组(为本课题组前期实验已确定的最佳剂量组),每组8只;另在空白组中随机选取8只大鼠设为正常组。药物组以15 g·kg^-1生药量进行灌胃,模型组和正常组均予等量蒸馏水进行灌胃,1次/d,共6周。禁食不禁水12 h,麻醉后进行样本采集,检测并计算大鼠体质量、Lee’s指数和肥胖率,按试剂盒说明书采用全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测SD大鼠肾周脂肪组织炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1的表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肾周脂肪组织Beclin-1、LC3 mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肾周脂肪组织Beclin-1、LC3蛋白表达;采用透射电镜观测腹周脂肪组织脂肪细胞超微结构与自噬体的改变。结果高脂饲料喂养可成功复制肥胖痰湿证模型,造模组大鼠肥胖率大于20%,与空白组比较,模型组体质量、Lee’s指数呈显著升高(P<0.01,P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠体质量显著升高(P<0.01),血脂水平呈显著改变(P<0.01),肾周脂肪组织炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1的表达水平显著升高(P<0.01),自噬基因Beclin-1、LC3 mRNA与蛋白水平显著升高(P<0.01),与模型组比较,药物组体质量、Lee’s指数显著下降(P<0.01,P<0.05),血脂水平显著变化(P<0.01),肾周脂肪组织炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1表达水平显著下降(P<0.01),自噬基因Beclin-1、LC3 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),透射电镜观察显示,正常组的细胞结构完整,表面突起,细胞核不规则,细胞器较丰富;模型组的细胞表面突起严重,细胞核不规则,细胞器较丰富,线粒体嵴破坏显著,出现碎解和分离现象,胞浆内有空泡,自噬体较多。药物组的细胞表面稍突起,细胞核不规则,部分线粒体嵴破坏,部分胞浆内有空泡,自噬体减少。结论温胆汤可有效改善肥胖大鼠痰湿证的炎症状态,其机理可能与调节肾周脂肪细胞自噬活性有关,这为经典治痰名方温胆汤干预肥胖痰湿证提供了实验依据。