| 摘 要： | 目的:探讨姜黄素联合脂肪间充质干细胞(ADSCs)促进大鼠皮肤创面愈合的效应及相关信号通路的研究。方法:用酶消化法分离和培养大鼠ADSCs,流式细胞仪鉴定干细胞表面抗原。取活性良好的第3代细胞,不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L)的姜黄素作用于ADSCs,通过CCK8法测定干细胞的存活率,筛选姜黄素最适宜浓度。40只雄性SD大鼠切除背部直径1 cm全层皮肤,建立皮肤创面模型,按照不同治疗方法分为模型对照组、干细胞组、姜黄素20μmol/L组、姜黄素20μmol/L联合干细胞组,测量记录各组0、3、7、14 d的皮肤创面愈合率。治疗后7 d ELISA法检测大鼠血清成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。治疗后14 d HE染色观察各组大鼠皮肤创面情况,Masson染色观察胶原纤维含量,免疫荧光观察干细胞数量及分布情况。荧光定量PCR检测各组大鼠皮肤创面组织内Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果:流式细胞仪鉴定ADSCs表面抗原CD44、CD90阳性,CD34阴性。CCK8法检测姜黄素在20μmol/L时对干细胞增殖无明显毒性作用。与模型对照组比较,干细胞组、姜黄素20μmol/L组、姜黄素20μmol/L联合干细胞组的皮肤创面愈合率、胶原纤维面积百分比、血清生长因子FGF、VEGF、TGF-β明显升高(P<0.05),血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05),Wnt4、β-catenin mRNA表达明显上调(P<0.05),与姜黄素20μmol/L联合干细胞组比较,姜黄素组FGF、VEGF、TGF-β含量、胶原纤维面积明显降低,IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高,Wnt4、β-catenin mRNA明显下调(P<0.05或P<0.01)。姜黄素20μmol/L联合干细胞组皮肤创面中的ADSCs荧光表达明显高于干细胞组(P<0.05),ADSCs主要分布在真皮层和表皮基底层。结论:姜黄素联合ADSCs可促进大鼠皮肤创面愈合,提高移植后干细胞的存活率,可能与刺激相关生长因子分泌,减少炎症因子含量,上调Wnt4/β-catenin相关信号通路有关。
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