| 嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测 |
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| 引用本文： | 单小云,胡野,应延风,屠平光. 嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测[J]. 中国人兽共患病杂志, 2010, 26(6): 546-550 |
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| 作者姓名： | 单小云 胡野 应延风 屠平光 |
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| 作者单位： | 金华市中心医院检验科;金华职业技术学院人畜共患病研究所; |
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| 摘 要： | 目的确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR。方法通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMMServer v.2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域。根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列。根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测。结果研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面。不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%。在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,最高达4.3倍(P<0.05)。基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌。结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断。
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| 关 键 词： | 嗜肺军团菌 lvgA基因 实时荧光定量RT-PCR |
| 收稿时间： | 2010-06-20 |
Sequences analysis of lvgA genes from different Legionella pneumophila strains and the application of real-time qRT-PCR for early detection |
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| SHAN Xiao-Yun,HU Ye,YING Yan-Feng,TU Ping-Guang. Sequences analysis of lvgA genes from different Legionella pneumophila strains and the application of real-time qRT-PCR for early detection[J]. Chinese Journal of Zoonoses, 2010, 26(6): 546-550 |
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| Authors: | SHAN Xiao-Yun HU Ye YING Yan-Feng TU Ping-Guang |
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| Affiliation: | 1.Jinhua Central Hospital,Jinhua 321000,China;2.Institute of Zoonosis,Jinhua College of Vocation and Technology,Jinhua 321007,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Legionella pneumophila lvgA gene real-time qRT-PCR |
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