去泛素连接酶USP9X通过调控FOXM1介导糖酵解影响鼻咽癌细胞增殖的机制研究

目的 ：探讨去泛素连接酶USP9X(deubiquitin ligase 9X)是否通过调控叉头框蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)介导糖酵解从而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。方法 ：采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测鼻咽癌组织和正常鼻黏膜组织以及鼻咽癌细胞中USP9X m RNA和蛋白的表达情况。通过病毒感染的方法将携带有特异性针对USP9X基因的sh RNA(sh USP9X)和携带有USP9X全基因的重组质粒Flag-USP9X（过表达USP9X）分别转入鼻咽癌CNE2和HNE2细胞，采用CCK-8法检测沉默或过表达USP9X基因对鼻咽癌细胞增殖的影响，通过对细胞能量代谢和细胞外酸化率（extracellular acidification rate,ECAR）的检测分析对鼻咽癌细胞糖酵解能力的影响。通过ubibrowser＿v3/数据库、免疫共沉淀和ZDOCK软件分析USP9X与FOXM1蛋白的结合情况，并通过泛素化实验观察沉默USP9X对FOXM1蛋白泛素化水平的影响；随后进一步通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测对FOXM1 m RNA和蛋白表...