E2F转录因子1抑制神经母细胞瘤细胞衰老的作用及其机制题录 |
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引用本文: | 杜昕怡,李聃,童强松.E2F转录因子1抑制神经母细胞瘤细胞衰老的作用及其机制题录[J].中华实验外科杂志,2024(2). |
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作者姓名: | 杜昕怡 李聃 童强松 |
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作者单位: | 华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(82072801、82173316、82293663); |
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摘 要: | 目的探讨E2F转录因子1(E2F1)对神经母细胞瘤(NB)细胞衰老的调控作用及机制。方法人神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE (2) (CRL-2271)购自美国典型培养物保藏中心, 并将NB细胞株分为空载体(Mock)对照组、E2F1过表达组、随机干扰(sh-Scb)组、E2F1短发卡RNA (sh-E2F1)干扰组, 筛选稳定亚克隆细胞株;采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测NB细胞中E2F1表达变化;通过Kaplan-Meier Plot、ChEA3等数据库分析, 寻找NB细胞衰老相关靶基因;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色12 h后, 检测β-半乳糖苷酶活性, 计算衰老细胞阳性率;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)掺入细胞2 h后, 观测细胞增殖活性;软琼脂三维培养3周, 观测细胞克隆形成能力;基质胶侵袭24 h, 测细胞侵袭活性;组间比较采用t检验。结果过表达E2F1组的E2F1转录水平高于Mock组(3.24±0.12比1.00±0.04, t=32.06, P<0.05), 且E2F1蛋白水平也...
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关 键 词: | 神经母细胞瘤 E2F转录因子1 细胞衰老 |
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