| 人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 张斌;,单志新;,林秋雄;,周志凌;,邓春玉;,林;,符永恒;,谭虹虹;,余细勇;. 人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定[J]. 中国病理生理杂志, 2007, 23(7): 1402-1407. DOI: 1000-4718 |
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| 作者姓名： | 张斌 ,单志新 ,林秋雄 ,周志凌 ,邓春玉 ,林 ,符永恒 ,谭虹虹 ,余细勇 |
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| 作者单位： | 1 广东省人民医院医学研究中心， 2 广东省心血管病研究所， 广东 广州 510080 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（No.30672077,No.30571850）;广东省自然科学基金资助项目（No.06020831） |
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| 摘 要： | 目的: 构建人miR-133a重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)中的表达。方法: 从人基因组DNA中扩增包含miR-133a的PCR产物，并定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经pmeⅠ线性化的重组穿梭载体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183，通过同源重组获得重组腺病毒质粒rAd-mir-133a。将rAd-mir-133a在人胚肾293细胞（HEK293）中包装并扩增出miR-133a的重组腺病毒。将重组腺病毒感染hMSCs，利用RT-PCR和实时定量PCR分别检测初级miR-133a和成熟miR-133a的表达。结果: 限制性内切酶分析和DNA测序结果显示，重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-133a构建正确。在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-133a。rAd-miR-133a感染的hMSCs中初级miR-133a转录子和成熟miR-133a表达显著增强。结论: 成功构建了人miR-133a 重组腺病毒，并在hMSCs中高效表达出miR-133a，为进行miR-133a的功能研究创造条件。
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| 关 键 词： | 微小RNA 载体构建 骨髓间质干细胞 腺病毒 |
| 文章编号： | 1000-4718（2007）07-1402-06 |
| 收稿时间： | 2007-02-10 |
| 修稿时间： | 2007-02-102007-05-18 |
Construction of recombinant adenovirus vector carrying human miR-133a and its expression in vitro |
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| ZHANG Bin,HAN Zhi-xin,LIN Qiu-xiong,ZHOU Zhi-ling,DENG Chun-yu,GUO Ai-lin,FU Yong-heng,TAN Hong-hong,YU Xi-yong. Construction of recombinant adenovirus vector carrying human miR-133a and its expression in vitro[J]. Chinese Journal of Pathophysiology, 2007, 23(7): 1402-1407. DOI: 1000-4718 |
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| Authors: | ZHANG Bin HAN Zhi-xin LIN Qiu-xiong ZHOU Zhi-ling DENG Chun-yu GUO Ai-lin FU Yong-heng TAN Hong-hong YU Xi-yong |
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| Affiliation: | 1 Research Center of Medical Sciences, Guangdong Provincial Peoples Hospital, 2 Guangdong Provincial Cardiovascular Diseases Institute, Guangzhou 510080, China. E-mail：yuxycn@hotmail.com |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | microRNA Vector construction Bone marrow mesenchymal stem cells Edenovirus |
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