| LOX-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 周蒨,吴慧恒,陈信良,董晓燕.LOX-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定[J].同济大学学报(医学版),2017,38(1):18-23. |
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| 作者姓名： | 周蒨 吴慧恒 陈信良 董晓燕 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科,上海 200030,同济大学附属同济医院妇产科,上海 200065,上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科,上海 200030,克拉玛依市中心医院妇产科,新疆 克拉玛依 834000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81571419)；上海交通大学医工交叉项目(YG2015MS40) |
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| 摘 要： | 目的 构建LOX-shRNA的慢病毒表达载体及其病毒包装鉴定。方法 利用Oligo Designer 3.0,根据人LOX基因序列设计shRNA,并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入LOX表达载体中,构建shRNA表达质粒,并转化至E.coli TOP10感受态细胞,抽提质粒后进行测序。将重组质粒转染HEK-293T细胞,应用RT-PCR检测各组LOX基因mRNA的表达水平,筛选出最有效的LOX-shRNA后,通过LipofectAMINETM2000介导转染293T细胞,对慢病毒进行包装并测定慢病毒滴度。结果 利用慢病毒介导将重组质粒LOX-shRNA-3024高效转导入HEK-293T细胞并稳定表达。荧光显微镜显示,转染24h后,HEK-293T细胞即开始发出绿色荧光；72h后,有大量荧光表达,而对照组未转染质粒的HEK-293T细胞不表达,可见慢病毒载体被成功转染。LOX-3024重组慢病毒的滴度为2×1010TU/ml。结论 成功构建LOX-shRNA慢病毒表达载体,并稳定转染HEK-293T细胞,为研究LOX对人阴道壁成纤维细胞生物学行为的影响提供了实验基础。
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| 关 键 词： | LOX基因 盆腔脏器脱垂 慢病毒载体 RNA干扰 |
| 收稿时间： | 2016/10/11 0:00:00 |
Construction and identification of LOX-shRNA lentiviral expression vector |
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| ZHOU Qian,WU Hui-heng,CHEN Xin-liang and Dong Xiao-yan.Construction and identification of LOX-shRNA lentiviral expression vector[J].Journal of Tongji University(Medical Science),2017,38(1):18-23. |
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| Authors: | ZHOU Qian WU Hui-heng CHEN Xin-liang and Dong Xiao-yan |
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| Institution: | Dept.of Gynecology, International Peace Maternity and Child Health Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200030, China,Dept.of Gynecology and Obstetrics, Tongji Hospital, Tongji University, Shanghai 200065, China,Dept.of Gynecology, International Peace Maternity and Child Health Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200030, China and Dept.of Obstetrics and Gynecology, Karamay Central Hospital, Karamay 834000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LOX gene pelvic organ prolapse lentiviral vector RNA interference |
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