| L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化中的作用 |
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| 引用本文： | 高倩倩,葛剑平,琚燕琴,高健,吴美生,赵守亮. L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化中的作用[J]. 同济大学学报(医学版), 2015, 36(2): 24-28 |
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| 作者姓名： | 高倩倩 葛剑平 琚燕琴 高健 吴美生 赵守亮 |
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| 作者单位： | 同济大学附属口腔医院牙体牙髓科, 上海 200072,同济大学附属口腔医院牙体牙髓科, 上海 200072,同济大学附属口腔医院牙体牙髓科, 上海 200072,同济大学附属口腔医院牙体牙髓科, 上海 200072,同济大学附属口腔医院牙体牙髓科, 上海 200072,同济大学附属口腔医院牙体牙髓科, 上海 200072 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81070825,1)；上海市科委医学引导项目(10411964600) |
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| 摘 要： | 目的 探讨L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞向成牙本质细胞样细胞分化过程中的作用。方法 利用酶消化法分离大鼠根尖牙乳头干细胞,体外扩增,结晶紫染色检测牙乳头干细胞的克隆形成率；利用慢病毒转染系统介导pLVX-shRNA2质粒在牙乳头干细胞中表达,抑制牙乳头干细胞中Cav 1.2基因的表达。荧光显微镜下观察转染牙乳头干细胞绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR及Western印迹法检测牙乳头干细胞中Cav 1.2基因沉默效率；矿化诱导体系下诱导Cav 1.2基因沉默牙乳头干细胞向成牙本质细胞样细胞分化,应用茜素红染色检测Cav 1.2对牙乳头干细胞成牙向分化的影响。结果 牙乳头干细胞的克隆形成能力为每200个细胞形成6~10个克隆；PCR及Western印迹法结果显示牙乳头干细胞Cav 1.2基因沉默效率达到70%；在牙乳头干细胞成牙向诱导第10天时,与对照组Luc-Cav 1.2相比,Cav 1.2基因沉默组成牙相关基因DSPP表达水平明显下降,同样茜素红染色结果显示Cav 1.2基因沉默牙乳头干细胞钙化结节形成也受到明显抑制。结论 L型钙离子通道Cav 1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞向成牙本质细胞样细胞分化的过程中发挥着非常重要的作用。【摘要】目的 利用慢病毒转染系统构建Cav 1.2基因沉默的大鼠根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla, SCAPs),探讨Cav 1.2在大鼠牙乳头干细胞成牙向分化中的作用。方法 取3周龄SD大鼠,采用酶消化法获取大鼠根尖牙乳头干细胞,取第二代大鼠根尖牙乳头干细胞进行克隆平板实验鉴定其增值能力；采用慢病毒转染的方法构建Cav 1.2基因沉默Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞及对照组Luc-Cav 1.2牙乳头干细胞, RT-PCR及Western印迹法鉴定其转染效率,并诱导其向成牙本质细胞样细胞分化；在成牙向诱导分化第10天,RT-PCR及茜素红S染色观察Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化的影响。结果 分离获得较强增殖能力的大鼠牙乳头干细胞,其中每200个细胞可形成6~10个克隆；荧光倒置显微镜下转染48h,Sh-Cav 1.2及Luc-Cav 1.2均呈现绿色荧光,转染效率均达到90%；在两组细胞成牙向诱导过程中,实验组Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞成牙相关基因DSPP的表达及钙化结节的形成均明显低于对照组Luc-Cav 1.2。结论 L型钙离子通道Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化有重要作用。
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| 关 键 词： | 根尖牙乳头干细胞 L型钙离子通道 基因沉默 成牙向分化 |
| 收稿时间： | 2014-11-02 |
Effect of L-type calcium channels Cav 1.2 on odontoblasticdifferentiation in rat apical papilla cells |
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| GAO Qian-qian,GE Jian-ping,JU Yan-qin,GAO Jian,WU Mei-sheng and ZHAO Shou-liang. Effect of L-type calcium channels Cav 1.2 on odontoblasticdifferentiation in rat apical papilla cells[J]. Journal of Tongji University(Medical Science), 2015, 36(2): 24-28 |
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| Authors: | GAO Qian-qian GE Jian-ping JU Yan-qin GAO Jian WU Mei-sheng ZHAO Shou-liang |
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| Affiliation: | Dept. of Conservative Dentistry, Stomatology Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China,Dept. of Conservative Dentistry, Stomatology Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China,Dept. of Conservative Dentistry, Stomatology Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China,Dept. of Conservative Dentistry, Stomatology Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China,Dept. of Conservative Dentistry, Stomatology Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China and Dept. of Conservative Dentistry, Stomatology Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | apical papilla cells L-type calcium channels gene silencing odontoblastic differentiation |
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