新生大鼠Klliker器支持细胞体外凋亡及增殖的研究

目的:研究体外Klliker器支持细胞的增殖及凋亡情况,并探讨促进Klliker器支持细胞在体凋亡的可能因素。方法:采用机械分离和酶消化结合的方法提取新生大鼠Klliker器支持细胞并体外培养,通过流式细胞仪检测细胞纯度、凋亡率及凋亡周期,通过MTT法检测该细胞的生长曲线,并运用Realtime PCR及Western blot方法观察不同时间点Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及Bcl-2的表达规律;改变体外培养Klliker器支持细胞培养液中Ca2+、K+及谷氨酸浓度,采用MTT法检测Klliker器支持细胞的存活率。结果:Klliker器支持细胞纯度高达96.56%,呈明显的线性增长;各组细胞的Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及Bcl-2的mRNA及蛋白的表达稳定。提高Klliker器支持细胞外液中Ca2+浓度导致细胞活性降低,而细胞外K+对Klliker器支持细胞活性的影响表现为浓度依赖性,高浓度的谷氨酸对Klliker器支持细胞有一定的保护作用。结论:大鼠Klliker器支持细胞在体外无明显凋亡,呈线性增长趋势。高浓度的Ca2+可能是引起在体Klliker器支持细胞逐渐凋亡的因素,而高浓度的K+及谷氨酸对在体Klliker器支持细胞有一定的保护作用。