| 摘 要： | 目的通过使用信号抑制子(SOCS1)反义寡核苷酸干预,从细胞和分子水平阐明SOCS1如何介导CT-1对心肌细胞缺氧复氧损伤中保护作用。方法将改良法培养的出生1-3 d的乳鼠心肌细胞分为5组:①对照组:DMEM液培养6 h;②缺氧／复氧组:缺氧3 h,复氧培养3 h;⑧缺氧／复氧 CT-1组(CT-1组):缺氧3 h后,加CT-1(10ng／mL)进行复氧3 h处理;④缺氧／复氧 CT-1 反义SOCS1组(反义SOCS1组,终浓度为10μmol/L):反义SOCS1培养24 h后,缺氧3 h,加CT-1(10 ng／mL)进行复氧3 h处理;⑤缺氧／复氧 CT-1 正义SOCS1组(正义SOCS1组,终浓度为10μmol/L):加正义SOCS1培养24 h后,缺氧3 h,加CT-1(10 ng／mL)进行复氧3 h处理。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化氰碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(mPTP),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),心肌细胞凋亡率用流式细胞仪检测。心肌细胞eNOSmRNA和SOCS1mRNA表达采用RT-PCR法,蛋白免疫印迹(WeStern blot)检测SOCS1和磷酸化SFAT3蛋白。结果:缺氧复氧后心肌细胞搏动频率明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整。心肌细胞存活率明显降低,凋亡率明显增加。CT-1处理组搏动频率与缺氧复氧组比明显加快,与对照组相近,节律较整齐。反义SOCS1干预后,频率明显减慢,搏动幅度减弱,节律明显不规则;与CT-1组比较,心肌细胞存活率下降,心肌细胞凋亡率增加,分别为(87．8％±7．5％比74．8％±5．2％;5．8％±1．5％比12．8％±1．5％,尸值均<0．05),LDH增加,正义SOCS1并不干扰CT-1的作用。缺氧复氧损伤后心肌细胞ROS水平明显升高(14．28±1．42比3．54±0．86,P<0．001),CT-1组心肌细胞ROS水平较缺氧复氧损伤组下降(6．73±1．21比14．28±3．42,P<0．01),接近空白对照组。加反义SOCS1干预后ROS水平则明显增加。流式细胞仪结果示;缺氧／复氧损伤组心肌细胞△(?)明显小于对照组, CT-1组较缺氧复氧升高(12．93±1．46比4．62±0．38, P<0．05),加反义SOCS1后△(?)水平则小于CT-1组(6．86±0．75比12．93±1．46,P<0．05)．正义SOCS1组结果与CT-1组类似。荧光显微镜结果:缺氧复氧损伤组心肌细胞绿色荧光强度明显强于对照组,表明线粒体膜转运孔mPTP受到破坏。CT-1预处理后心肌细胞JC1荧光强度明显减弱,反义SOCS1干预后,心肌细胞mPTP下降,荧光强度增强。而正义SOCS1组结果与CT-1组类似。缺氧复氧组较空白对照组SOCS1 mPNA表达和SOCS1蛋白水平有所增加;而CT-1组SOCS1 mRNA表达和SOCS1蛋白水平均较缺氧复氧组显著升高(1．596±0．065比0．639±0．063;2．568土0．219比s1．539±0．127,P<0．05),表明CT-1促进心肌细胞SOCS1表达。加SOCS1反义寡核苷酸后SOCS1mRNA和蛋白水平较CT-1组明显下降(1．596±0．065比0．896±0．065:1．945±0．158比2．568±0．219,P0．05),表明SOCSI抑制CT-1引起的STAT3磷酸化。结论细胞因子信号抑制物SOCSI介导了心肌营养素-1减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤。
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