| 卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究 |
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| 引用本文： | 陈秀英,卢春,程林,曾怡,姚水洪,秦娣.卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究[J].南京医科大学学报,2006,26(10):881-886. |
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| 作者姓名： | 陈秀英 卢春 程林 曾怡 姚水洪 秦娣 |
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| 作者单位： | 南京医科大学微生物学与免疫学系 江苏南京210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;霍英东教育基金 |
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| 摘 要： | 目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达。方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1( )。进一步在原有的下游引物5′端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒。将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆。最后用抗flagM2单克隆抗体进行Westernblot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达。结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHVvIL-6基因呈现100%同源性。Westernblot结果显示,在约25ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致。结论:KSHVvIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达。
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| 关 键 词： | 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 病毒编码IL-6 flag序列 真核表达 |
| 文章编号： | 1007-4368（2006）10-0880-06 |
| 收稿时间： | 2006-03-26 |
| 修稿时间： | 2006年3月26日 |
Study on Isolation and cloning of vIL-6 gene of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus and its expression in NIH3T3 cells |
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| CHEN Xiu-ying,LU Chun,CHENG Lin,ZENG Yi,YAO Shui-hong,QIN Di.Study on Isolation and cloning of vIL-6 gene of Kaposi''s sarcoma-associated herpesvirus and its expression in NIH3T3 cells[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2006,26(10):881-886. |
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| Authors: | CHEN Xiu-ying LU Chun CHENG Lin ZENG Yi YAO Shui-hong QIN Di |
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| Institution: | Department of Microbiology and Immunology, NJMU, Nanjing 210029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus IL-6 gene encoded by virus flag sequence eukaryotic expression |
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