| 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选 |
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| 引用本文： | 原薇薇,杨杰,王冬梅,胡珍,朱军民,陈志瑾,张俊磊,王嘉丽,刘佳,饶贤才. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选[J]. 第三军医大学学报, 2010, 32(8): 749-753 |
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| 作者姓名： | 原薇薇 杨杰 王冬梅 胡珍 朱军民 陈志瑾 张俊磊 王嘉丽 刘佳 饶贤才 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30571666,30772061)~~ |
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| 摘 要： | 目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHⅠ位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a发生相互作用的蛋白质或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a TPase与大肠埃希菌RNA聚合酶α亚单位N端序列的融合蛋白。所构建的MRSA N315株基因组文库覆盖率达9倍,满足文库筛选的需要。将文库转化含诱饵质粒和报告基因的KS1宿主菌,利用细菌双杂交技术经3次筛选,共获得9个猎物克隆,其报告基因的活性均升高2倍以上,对9个猎物质粒进行了测序,信息学分析表明它们均来自于MRSA N315株基因组,插入片段最长者648 bp,最短者334 bp,9个插入片段中含14个编码基因,...
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| 关 键 词： | 基因组DNA文库 PBP2a蛋白 细菌双杂交系统 蛋白质间相互作用 |
Screening of proteins interacting with PBP2a in methicillin-resistant Staphylococcus aureus |
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| Yuan Weiwei,Yang Jie,Wang Dongmei,Hu Zhen,Zhu Junming,Chen Zhijin,Zhang Junlei,Wang Jiali,Liu Jia,Rao Xiancai. Screening of proteins interacting with PBP2a in methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2010, 32(8): 749-753 |
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| Authors: | Yuan Weiwei Yang Jie Wang Dongmei Hu Zhen Zhu Junming Chen Zhijin Zhang Junlei Wang Jiali Liu Jia Rao Xiancai |
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| Affiliation: | Department of Microbiology;College of Basic Medical Sciences;Third Military Medical University;Chongqing;400038;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | genomic DNA library PBP2a protein bacterial two-hybrid system protein-protein interaction |
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