异丙酚抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的 探讨异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制.方法 使用4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)中含有1％(w/v)胰蛋白酶、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)和0.1％胶原酶的酶混合物,将切碎的心室心肌连续消化,将分离的细胞混合物在培养箱中预铺板1 h,以分离成纤维细胞.将培养细胞分为对照组、诱导组、异丙酚处理组和抑制剂组.通过5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入测定法检测细胞增殖;通过使用WST-1测定法测量细胞活力;通过发光素增强化学发光法测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和活性氧(ROS)活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化和激活蛋白-1(AP-1)、内皮素-1(ET-1)mRNA相对表达水平;Western blot分析蛋白激酶B(Akt)、一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 第24、72小时,诱导组较对照组细胞增殖能力增强,异丙酚处理组较诱导组减弱(P<0.05).与对照组比较,诱导组细胞凋亡率降低,细胞活力升高;与诱导组比较,异丙酚处理组细胞凋亡率升高,细胞活力降低(P<0.05).诱导组NADPH、ROS活性较对照组升高,异丙酚处理组较诱导组降低(P<0.05).诱导组ERK、AP-1和ET-1 mRNA相对表达水平较对照组升高,异丙酚处理组较诱导组降低(P<0.05).异丙酚处理组Akt、eNOS表达水平较诱导组降低,抑制剂组较异丙酚处理组升高(P<0.05).结论 异丙酚可通过干扰ROS的生成来抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖.