| pEGFP-N1-linamarase重组真核表达载体的构建及linamarase在MH-CC97中的表达 |
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| 引用本文： | 马俊,陈明浩,窦科峰,李军,郑伟,霍斌亮,张福琴,李海民. pEGFP-N1-linamarase重组真核表达载体的构建及linamarase在MH-CC97中的表达[J]. 医学争鸣, 2008, 29(7): 577-580 |
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| 作者姓名： | 马俊 陈明浩 窦科峰 李军 郑伟 霍斌亮 张福琴 李海民 |
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| 作者单位： | 第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033;第四军医大学西京医院肝胆外科,陕西西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的:构建携带木薯亚麻苦甙水解酶(lis)基因,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导人人肝癌细胞MHCCW中表达.方法:提取木薯总RNA,PCR扩增lis目的基因,将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒载体.利用电穿孔转染体外培养的MHCC97,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察lis-EGFP融合蛋白在细胞中的表达;PCR检测lis基因转录水平的表达;Western Blot方法验证lis蛋白水平的表达.结果:PCR扩增片段与预期结果相符,酶切和测序证明pEGFP-N1-lis真核表达载体构建成功.pEGFP-N1-lis转染MHCC97细胞后,Western Blot可以检测到lis蛋白在MHCC97细胞表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论:成功构建真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1-lis,可为后续lis基因功能的研究奠定实验基础.
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| 关 键 词： | 木薯亚麻苦甙水解酶 聚合酶链反应 基因转染 自杀基因 |
| 文章编号： | 1000-2790(2008)07-0577-04 |
| 修稿时间： | 2007-10-29 |
Construction of pEGFP-N1-linamarase fusion gene in eukaryotic expression vector and its expression in MHCC97 cells |
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| MA Jun,CHEN Ming-Hao,DOU Ke-Feng,LI Jun,ZHENG Wei,HUO Bin-Liang,ZHANG Fu-Qin,LI Hai-Min. Construction of pEGFP-N1-linamarase fusion gene in eukaryotic expression vector and its expression in MHCC97 cells[J]. Negative, 2008, 29(7): 577-580 |
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| Authors: | MA Jun CHEN Ming-Hao DOU Ke-Feng LI Jun ZHENG Wei HUO Bin-Liang ZHANG Fu-Qin LI Hai-Min |
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