MDR1 shRNA表达质粒的构建

目的构建由pSIREN—RetroQ-ZsGreeen载体介导、表达MDR1短发卡RNA（shorthairpinRNA，shRNA）的重组质粒。方法分别针对MDR1基因的两个不同位点，按BamHI＋Sense＋Loop＋Antisense＋终止信号＋EcoRI结构合成编码shRNA的DNA序列及其反义序列，退火连接及磷酸化形成双链后，将其依次导入pSIREN—RetroQ—ZsGreeen载体，构建成能产生MDR1shRNA的质粒，并进行序列分析。结果重组质粒（pSIREN—RetroQ-ZsGreeen—A和pSIREN—RetroQ—ZsGreeen—B）经酶切与测序证实两段寡核苷酸片段成功插入到预计位点，序列完全一致，无任何碱基突变。结论MDR1shRNA的表达载体pSIREN—RetroQ—ZsGreeen—A和pSIREN—Ret—roQ—ZsGreeen-B成功构建，为进一步研究肿瘤多药耐药逆转奠定了实验基础。