| 人miR-139高效真核表达载体的构建及其功能初探 |
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| 引用本文： | 张乐之,张彦,李德彬,叶丙雨,肖丽霞,赵玉军,赵志虎.人miR-139高效真核表达载体的构建及其功能初探[J].军事医学科学院院刊,2012,36(1):40-43. |
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| 作者姓名： | 张乐之 张彦 李德彬 叶丙雨 肖丽霞 赵玉军 赵志虎 |
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| 作者单位： | 1. 沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳,110866
2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 |
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| 摘 要： | 目的 构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能.方法 设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列.将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139.将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平.结果 酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显.结论 成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础.
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| 关 键 词： | miR-139 真核表达载体 qRT-PCR ZR75-1 癌基因 |
Construction of eukaryotic expression vector of miR-139 and its effect on proliferation of ZR75-1 cells |
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| ZHANG Le-zhi,ZHANG Yan,LI De-bin,YE Bing-yu,XIAO Li-xia,ZHAO Yu-jun,ZHAO Zhi-hu.Construction of eukaryotic expression vector of miR-139 and its effect on proliferation of ZR75-1 cells[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2012,36(1):40-43. |
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| Authors: | ZHANG Le-zhi ZHANG Yan LI De-bin YE Bing-yu XIAO Li-xia ZHAO Yu-jun ZHAO Zhi-hu |
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| Institution: | 1.College of Veterinary and Animal Science,Shenyang Agriculture University,Shenyang 110866,China;2.Institute of Biotechnology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | miR-139 eukaryotic expression vector qRT-PCR ZR75-1 oncogenes |
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