| 小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究 |
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| 引用本文： | 马洁,王胜军,毛朝明,杨敏,王锁英,许小朋,邱谷风,胡正军,姜旭淦,邵启祥,丁庆,许化溪.小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究[J].中国免疫学杂志,2009,25(8). |
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| 作者姓名： | 马洁 王胜军 毛朝明 杨敏 王锁英 许小朋 邱谷风 胡正军 姜旭淦 邵启祥 丁庆 许化溪 |
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| 作者单位： | 1. 江苏大学检验医学研究所免疫学研究室,镇江,212013
2. 江苏大学附属医院,镇江,212001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省自然科学基金，江苏大学拔尖人才培养工程和高级人才启动基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清.方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌.阳性克隆经鉴定后用IPTG诱导GITRL蛋白表达,经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot进行特异性鉴定,CD4+CD25+T细胞免疫抑制试验验证其生物学功能.采用弗氏完全佐剂常规免疫方案,制备抗GITRL抗血清,抗血清的效价和特异性测定采用双向琼脂免疫扩散法.结果:经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在40 kD处呈现单一蛋白条带,该蛋白具有阻断CD4+CD25+T细胞免疫抑制功能的作用,双向免疫扩散结果显示兔抗小鼠GITRL抗血清效价为1∶16.结论:成功构建GITRL原核表达质粒,制备和纯化的GITRL融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,制备并获得特异性抗血清,可用于GITRL融合蛋白生物学活性的进一步研究.
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| 关 键 词： | 蛋白表达 融合蛋白 小鼠 |
Prokaryotic expression and purification of mouse GITRL fusion protein |
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| MA Jie,WANG Sheng-Jun,MAO Chao-Ming,YANG Min,WANG Suo-Ying,XU Xiao-Peng,QIU Gu-Feng,HU Zheng-Jun,JIANG Xu-Gan,SHAO Qi-Xiang,DING Qing,XU Hua-Xi.Prokaryotic expression and purification of mouse GITRL fusion protein[J].Chinese Journal of Immunology,2009,25(8). |
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| Authors: | MA Jie WANG Sheng-Jun MAO Chao-Ming YANG Min WANG Suo-Ying XU Xiao-Peng QIU Gu-Feng HU Zheng-Jun JIANG Xu-Gan SHAO Qi-Xiang DING Qing XU Hua-Xi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GITRL |
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