| 携带人血管内皮生长因子165慢病毒表达载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 易超,王喜艳,李海军,王海. 携带人血管内皮生长因子165慢病毒表达载体的构建与表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2012, 16(11): 1927-1932 |
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| 作者姓名： | 易超 王喜艳 李海军 王海 |
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| 作者单位： | 新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰腺肿瘤外科,新疆维吾尔自治区,乌鲁木齐市,830011 |
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| 基金项目： | 新疆维吾尔自治区自然基金面上项目,资质单位:新疆维吾尔自治区科学技术厅 |
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| 摘 要： | 背景:已有研究证实血管内皮生长因子在正常肝脏肝部分切除后余肝的再生过程中发挥着重要的作用,但关于其对肝硬化肝脏是否也有相同作用国内外鲜有报道。目的:构建携带人血管内皮生长因子165基因的慢病毒载体,体外转染BLR3A大鼠肝细胞并观察该细胞中人血管内皮生长因子165基因的表达。方法:采用DNA重组技术将人血管内皮生长因子165基因克隆入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体中,筛选出阳性克隆与慢病毒包装系统ViraPowerTM Packaging Mix共转染293T细胞产生病毒颗粒,通过实时定量-聚合酶链反应法测定病毒滴度;携带人血管内皮生长因子165基因的慢病毒载体体外转染BLR3A大鼠肝细胞72h后,利用反转录-聚合酶链反应及Western blot法检测细胞中人VEGF165mRNA及蛋白的表达。结果与结论:成功构建了表达人VEGF165基因的慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO-VEGF165,测得病毒滴度为1.18×107VP/mL。重组慢病毒载体转染BLR3A大鼠肝细胞72h后,荧光蛋白表达率超过80%,反转录-聚合酶链反应及Western blot法测得转染组人血管内皮生长因子165mRNA及血管内皮生长因子165蛋白表达阳性。提示构建的携带人血管内皮生长因子165的慢病毒载体可有效转染BLR3A大鼠肝细胞,并促使该细胞表达人血管内皮生长因子165mRNA及蛋白。
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| 关 键 词： | 人血管内皮生长因子165 慢病毒载体 BLR3A大鼠肝细胞 转染 基因治疗 |
Construction and expression of human vascular endothelial growth factor 165 gene lentiviral expression vector |
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| Yi Chao , Wang Xi-yan , Li Hai-jun , Wang Hai. Construction and expression of human vascular endothelial growth factor 165 gene lentiviral expression vector[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2012, 16(11): 1927-1932 |
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| Authors: | Yi Chao Wang Xi-yan Li Hai-jun Wang Hai |
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| Affiliation: | Department of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery, Affiliated Hospital of Xinjing Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China |
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