| pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析 |
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| 引用本文： | 陈可,王增产.pcDNA3.1载体对内参基因表达影响分析[J].重庆医科大学学报,2010,35(6). |
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| 作者姓名： | 陈可 王增产 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400016;重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的:研究转染质粒pcDNA3.1对内参基因表达影响差别,为今后在采用pcDNA3.1载体进行表达分析时内参基因的选择提供参考.方法:选用HepG2、HEK293、Hela、A549、QGY共5种细胞转染pcDNA3.1空载体质粒,转染后48 h提取细胞总RNA荧光定量PCR法比较内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphste dehydrogenase,GAPDH)、肌动蛋白(β-actin)、18sRNA表达水平差异,提取细胞总蛋白,检测GAPDH、β-actin表达水平差异.结果:5种细胞在转染质粒pcDNA3.1后,内参基因转录和蛋白表达均出现不同程度的下降,其中以β-actin下降最为明显,GAPDH及18sRNA在转录水平下降幅度小,且下降程度接近.结论:pcDNA3.1质粒转染造成基因表达非特异性抑制,其中对管家基因β-actin影响较大,因此在应用pcDNA3.1来源载体进行基因功能分析时,不推荐使用β-actin作为内参基因.
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| 关 键 词： | pcDNA3.1 内参基因 转染 转录 表达 |
Analysis of the effect of pcDNA3.1 on house keeping gene expression |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pcDNA3 1 |
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