白藜芦醇对HSC-T6细胞NLRP3炎性体活化的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6细胞内Nod样受体蛋白3(nodlike receptor protein 3,NLRP3)炎性体活化的影响,探讨Res抗肝纤维化的作用机制,为Res的临床应用提供理论依据.方法体外培养大鼠HSC系HSC-T6,细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入Res(4、8、16μmol/L)或乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)孵育24 h.随后加入过氧化氢(0.2 mmol/L)孵育4 h制作氧化应激模型.采用MTT法检测细胞增殖水平.ELISA法检测细胞培养上清液中的I型胶原(collagen type 1,COL-1)、转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量.荧光酶标仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量.Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、caspase1的表达.结果与对照组比较,Res在浓度范围4-64μmol/L对HSC-T6细胞均有显著的抑制效应(P0.01).与对照组比较,氧化应激模型组细胞增殖率,细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、IL-18含量,细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、caspase1-p10蛋白表达均呈显著增高趋势(P0.01);细胞上清液中SOD含量呈明显下降趋势(P0.01).与模型组比较,Res低、中、高剂量及阳性对照药NAC均可显著抑制HSC-T6细胞增殖率,减少细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、I L-18含量,细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、ASC、caspase1-p10蛋白表达(P0.01);显著提高细胞上清液中SOD的含量(P0.01).结论R e s能够通过调节ROS-NLRP3炎性体通路抑制HSC-T6细胞的增殖与活化.