嵌合抗原受体设计的NK细胞在多发性骨髓瘤中的应用研究 |
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引用本文: | 魏华萍,杨楠,谷振阳,赵莎莎,王飞雁,罗澜,管立勋,高春记.嵌合抗原受体设计的NK细胞在多发性骨髓瘤中的应用研究[J].中国实验血液学杂志,2018(3). |
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作者姓名: | 魏华萍 杨楠 谷振阳 赵莎莎 王飞雁 罗澜 管立勋 高春记 |
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作者单位: | 北京怀柔医院肿瘤血液科;中国人民解放军总医院血液科 |
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摘 要: | 目的:通过建立CAR(CD138-CD28-CD3ζ)-NK细胞,探讨CAR(CD138-CD28-CD3ζ)-NK细胞对多发性骨髓瘤的抗肿瘤作用。方法:把抗CD138scFv-CD28-CD3连接到pc DNA3.1质粒,使用三质粒慢病毒包装系统转染293T细胞,收集病毒后感染NK92MI细胞系,应用嘌呤霉素筛选阳性细胞株;通过RT-PCR及Western blot检测CAR在NK92MI细胞系的表达,流式细胞术检测NK92MI细胞分泌细胞因子cd107a的能力。结果:经过基因工程技术,体外构建了CAR基因片段,基因测序验证基因序列正确。通过病毒包装技术,获得表达该片段的病毒株。经过病毒转染实验,获得表达CAR融合蛋白的稳转NK细胞株。PCR及Western blot证实,CAR融合蛋白在NK细胞表达。细胞杀伤实验证实CARNK细胞分泌细胞因子cd107a的能力明显优于对照组,具有明显的杀伤多发性骨髓瘤细胞的效应。结论:CAR能在体外构建并在NK92细胞表面表达,CARNK细胞能杀伤表达CD138抗原的多发性骨髓瘤细胞株,从而发挥抗骨髓瘤效应。
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