急性髓系白血病(AML)中hsa_circ_0000254的实验研究

目的:通过克隆环状RNA hsa_circ_0000254,构建过表达载体并初步鉴定其表达水平,为进一步的功能研究奠定基础。方法:人工合成hsa_circ_0000254的524 bp序列,用pGH克隆载体合成基因,然后酶切目的片段,连接到慢病毒过表达载体pLCDH-ciR中,测序验证。筛选阳性克隆,分别以pLCDH-circ254(C254)、NC(pLCDH-ciR)转染293T细胞,培养40 h后收集细胞进行PCR检测及产物测序验证。结果:pLCDH-circ254表达载体经测序验证,测序峰图正常,且无杂峰或叠带,序列对比吻合,表明hsa_circ_0000254成功插入环状RNA表达载体pLCDHciR,过表达载体构建成功,表达效率高达1万倍。结论:成功构建hsa_circ_0000254表达载体,可高效表达hsa_circ_0000254。