利用单个核细胞培养扩增NK细胞体系探索

目的:探寻一种通过单个核细胞使自然杀伤(NK)细胞在体外培养扩增的新方法,为NK细胞免疫治疗奠定实验基础。方法:收集3份健康足月孕妇的脐带血,应用密度梯度法分离单个核细胞(PBMNC),每份单个核细胞样本均分为CD16 m Ab、CD3 m Ab和CD16 m Ab+CD3 m Ab处理3组。使用含自体血浆、重组人IL-2、IL-15和IL-21的无血清培养液,在相同条件下培养扩增14 d,计算其扩增倍数。应用流式细胞术测定CD56~+CD3~-比例;以K562细胞为靶细胞,应用MTT法测定所培养的NK细胞在不同效靶比条件下的杀伤率。结果:培养14 d后,CD16m Ab、CD3 m Ab和CD16 m Ab+CD3 m Ab组细胞总数分别扩增45.71±5.54、87.41±19.77和51.84±4.88倍,在CD3 m Ab组显著高于其它2组(P0.05)。培养前CD56~+CD3~-细胞比例为0.1663±0.0201,经培养扩增14 d后CD16 m Ab、CD3 m Ab和CD16 m Ab+CD3 m Ab组CD56~+CD3~-细胞比例分别为0.8167±0.0500、0.8077±0.0589和0.8077±0.0273,3组之间无显著性差别。培养14 d后,MTT法检测显示,在效靶比为1∶1、5∶1和10∶1时3组杀伤效率均无显著差异(P0.05)。结论:使用抗CD3 m Ab及IL-2,IL-15和IL-21培养单个核细胞,可获得高纯度和高杀伤活性的NK细胞。本研究为NK细胞的治疗提供了一个简单有效的方法。