米非司酮对胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响及其机制

目的：考察米非司酮对单用或合并使用胰岛素和地塞米松诱导的胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响，并初步探讨其作用机制。方法：1）将常规培养的人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组，胰岛素（5×10^-6、5×10^-1和5×10^-8mol·L^-1）组，地塞米松（3×10^-5和3×10^-6mol·L^1）组，胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6和1．5×10^-7mol·L^1）组。培养24或48h后，测定各组细胞葡萄糖消耗量，以考察人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗的形成情况，并通过胰岛素刺激和模型持续时间研究进一步验证造模效果。2）将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组，米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组，胰岛素（5×10^-7mol·L^1）组，胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6、1×10～×10^-7mol·L^1）组，地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组，地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组，胰岛素（2．5×10^-5mol·L^1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^1）组，胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组。分别加入不同浓度的药物培养24或48h，然后对各组细胞葡萄糖消耗量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位进行测定，以考察细胞功能状态变化。结果：1）胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）作用24h可诱导人脐静脉内皮细胞发生胰岛素抵抗并可维持24h，地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）作用48h可诱导细胞的胰岛索抵抗并可维持36h，胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6molL^-1）共同作用48h可诱导细胞的胰岛素抵抗并可维持24h。2）地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组，以及胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组人脐静脉内皮细胞的葡萄糖摄取量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位分别显著高于地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组和胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）组；胰岛素（5×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^-1）组细胞的上述指标则与胰岛素（5××10^-7mol·L^-1）组无显著性差异。结论：胰岛素、地塞米松单独使用及合用均可诱导人脐静脉内皮细胞出现胰岛素抵抗并持续一定时间；米非司酮可改善地塞米松及地塞米松＋胰岛素诱导的胰岛素抵抗内皮细胞的功能紊乱，而对胰岛素诱导的胰岛素抵抗无改善作用。

Effect and Mechanism of Mifepristone on Insulin-resistant Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Objective： To observe the effect of mifepristone on the cellular functions of human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） with insulin-resistance （IR） induced by insulin, dexamethasone and insulin ＋ dexamethasone, and to preliminarily discuss the related mechanism. Methods： 1） The HUVECs were randomly divided into normal group, insulin （5×10^-6、5×10^-1,5×10^-8mol·L^-1） groups, dexamethasone （3×10^-5,3×10^-6mol·L^1） groups, and insulin （2. 5 × 10-8mol. L-1） ＋ dexamethasone （ 1.5× 10-6, 1.5× 10-7 mol.L-1） groups. The cells were incubated with the drugs for 24 or 48 hours to induce IR in vitro, and the glucose consumption was determined in order to identify the IR model. Then the model was verified by insulin stimulation assay and the study on duration of IR. 2） The cells were randomly divided into normal group, mifepristone （1×10^-5、1×10^-6,1×10^-7mol·L^1） groups, insulin （5 ×10 -7 mol.L-1） group, insulin （5 × 10-7 mol.L-1） ＋ mifepristone （ 1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7mol·L^1） groups, dexamethasone （3 ×10-5 mol.L-1） group, dexamethasone （3× 10-5 mol.L-1） ＋ mifepristone （ 1 × 10-5, 1 × 10-6, 1 × 10-7 mol. L-1） groups, insulin （2. 5 × 10-8 mol. L-1） ＋ dexamethasone （ 1.5 ×10 -6 mol.L-1） group, insulin （2. 15× 10-8 mol.L-1） ＋ dexamethasone （ 1.5 × 10-6 mol.L-1） ＋ mifepristone （ 1 × 10-5, 1 × 10-6, 1 ×10-7 mol.L-1） groups. The cells were incubated with the drugs for 24 or 48 hours to induce IR in vitro, then the glucose consumption, NO level, anti-O2-, activity unit in the medium, and NOS activity of the cells were assayed. Results： 1） Insulin （5 × 10-7 mol.L-1） could induce IR of HUVECs with a 24-hour pretreatment and maintained a stable level for 24 hours; Dexamethasone （3 ×10-5 mol.L-1）could induce IR with a 48-hour pretreatment, and maintained a stable level for 36 hours; Pretreatment with insulin （2.5 ×10-8 mol.L-1） ＋ dexamethasone （ 1.5 × 10 -6 mol.L-l） for 48 hours could induce IR and maintained a ,stable level for 24 hours. 2） The glucose consumption, NO level, NOS activity and anti-O2-, activity unit of HUVECs in dexamethasone （3 × 10-5 mol.L-1） ＋ mifepristone （1 × 10-5, 1 × 10-6 mol.L-1） groups and insulin （2. 5 ×10-s mol.L-1） ＋ dexamethasone （ 1.5 × 10-6 mol.L-1） ＋ mifepristone （ 1 ×10 -5, 1× 10-6 mol.L-1） groups were higher, compared with those of dexamethe.sone （3 × 10-5 mol.L^-1） group and insulin （2.5× 10^-8 mol.L-1） ＋ dexamethasone （ 1.5 ×10-6 mol.L-1） group, respectively. There were no significant differences from those indexes between insulin （5 × 10-7 mol.L-1） group and insulin （5 × 10-7 mol.L-1） ＋ mifepristone （1 × 10-5, 1 × 10-6, 1× 10-7 mol.L^-1） groups. Conclusion： IR model of HUVEC can be established by using insulin and dexamethasone alone or together, while the dysfunction of the HUVECs with IR induced by dexamethasone and insulin ＋ dexamethasone may be attenuated by mifepristone. However, mifepristone can＇t reverse the dysfunction caused by IR induced by insulin.