靶向Hsp90β的siRNA对Jurkat细胞生长的抑制作用 |
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引用本文: | 索涛莉,徐酉华,刘筱梅,郭玉霞,罗庆,梁睿.靶向Hsp90β的siRNA对Jurkat细胞生长的抑制作用[J].第三军医大学学报,2010,32(17). |
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作者姓名: | 索涛莉 徐酉华 刘筱梅 郭玉霞 罗庆 梁睿 |
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作者单位: | 1. 重庆医科大学附属儿童医院血液科,重庆,400014 2. 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童肿瘤实验室,重庆,400014 |
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基金项目: | 重庆医科大学校级科研项目 |
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摘 要: | 目的 探讨RNA干扰技术沉默热休克蛋白90β(heat shock protein 90 beta,Hsp90β)基因表达对Jurkat细胞生长的抑制作用.方法 根据Hsp90β基因全长cDNA序列Hsp90B1(NM_003299.1),设计并构建针对Hsp90β基因的siRNA真核表达载体,应用LipofectamineTM LTX 转染入Jurkat细胞后,Real-time PCR检测 Hsp90β mRNA水平的变化,筛选出沉默效果最好的Hsp90β siRNA干扰片段;Western印迹法检测Hsp90β蛋白表达水平;MTT法和流式细胞仪检测干扰前后对Jurkat细胞生长抑制作用.结果 成功构建Hsp90β基因特异性的真核表达载体pSOS-Hsp90βi,转染Jurkat细胞后发现pSOS-Hsp90βi2的沉默效果最明显,Jurkat细胞Hsp90β mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05).Hsp90β基因表达沉默后,Jurkat细胞增殖明显受抑(P<0.01),实验组与对照组的细胞凋亡率分别为:(2.69±0.34)%、(3.63±0.38)%、(19.56±0.62)%, 细胞凋亡率比空白对照组及转染pSOS-Hsp90βi control组明显增加,差异具有显著意义(P<0.05).结论 靶向Hsp90β的siRNA下调Hsp90β表达对人白血病Jurkat细胞有明显的生长抑制作用.
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关 键 词: | RNA干扰 Hsp90β基因 Jurkat细胞 实时荧光定量PCR |
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