|
|||||
|
|
| 重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中 | |
| 引用本文： | 袁辉,刘笑迪,谭毅,林绍强,杨树林,李校堃. 重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中[J]. 温州医学院学报, 2007, 37(4): 303-308 |
| 作者姓名： | 袁辉 刘笑迪 谭毅 林绍强 杨树林 李校堃 |
| 作者单位： | 1. 温州医学院,生物与天然药物研究院,浙江,温州,325035 2. 吉林农业大学,生物工程技术研究院,吉林,长春,130118 3. 南京理工大学,生物工程研究所,江苏,南京,210094 |
| 基金项目： | 国家重大生物医药专题滚动项目，浙江省温州市科技局资助项目，温州医学院引进人才启动基金 |
| 摘 要： | 目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coli BL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平.方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coli BL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度.结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%～28%.LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3 mmol/L、氨苄青霉素添加量50 μg/ml时,表达效率提高了25%.结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义. |
| 关 键 词： | 重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体 质粒稳定性 大肠杆菌 诱导 酶切图谱 |
| 文章编号： | 1000-2138（2007）04-0303-06 |
| 修稿时间： | 2006-06-28 |
Research on the Expression of Recombinant Human aFGF Mutant in Escherichia coli |
|
| YUAN Hui,LIU Xiao-di,TAN Yi. Research on the Expression of Recombinant Human aFGF Mutant in Escherichia coli[J]. Journal of Wenzhou Medical College, 2007, 37(4): 303-308 | |
| Authors: | YUAN Hui LIU Xiao-di TAN Yi |
| Affiliation: | Institute of Biological and Natural Drugs, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035 |
| Abstract: | |
| Keywords: | recombinant human aFGF mutant plasmid stability Escherichia coli induction, restriction digestion graph |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ | |