人端粒酶催化亚基反义RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定*

背景：人端粒酶催化亚基与c-myc在喉鳞状细胞癌中有密切的相关性。 目的：构建含有c-myc启动子的人端粒酶催化亚基的重组腺病毒载体，观察人端粒酶催化亚基在细胞中表达后对细胞增长的影响。 方法：按照人工合成中反向转录的方法设计基因合成引物，用复式PCR获得目的片段ashTERT(322 bp)。将片段ashTERT克隆到pUC57(2.7 kb)克隆载体，然后热激转化到E.coli感受态细胞中，菌检、PCR、鉴定阳性克隆后，菌液放大培养，提取质粒pUC57-ashTERT，然后对质粒进行测序。将目的基因片段亚克隆到穿梭载体pshuttle-CMVneo上，然后构建重组腺病毒质粒pAd-ashTERT。转入293细胞中进行病毒包装、鉴定和滴度测定。 结果与结论：提取质粒pUC57-ashTERT，测序符合序列要求。质粒pUC57-ashTERT转入293细胞后，成功构建了有较强感染能力的含人端粒酶催化亚基基因的重组腺病毒载体。