人心肌肌钙蛋白玉鲁米诺化学发光酶免疫分析法的建立 |
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引用本文: | 李文丽,余鹃,向军俭,王宏.人心肌肌钙蛋白玉鲁米诺化学发光酶免疫分析法的建立[J].中国免疫学杂志,2018,34(5):712. |
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作者姓名: | 李文丽 余鹃 向军俭 王宏 |
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作者单位: | 暨南大学生命科学技术学院生物工程学系 |
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摘 要: | 目的:制备两株抗人心肌肌钙蛋白玉(human cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)单克隆抗体,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法。方法:制备腹水型单抗、饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱Protein G 纯化抗体,并通过SDS-PAGE 和ELISA 对抗体特异性进行鉴定,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法,并对30 份临床血清样本进行检测。结果:本实验制备的两株单抗(分别命名为Ab1、Ab3;亚型都是IgG1)能够识别以cTnⅠ单体、cTnⅠ-C 复合物和cTnⅠ-T-C 复合物不同形式存在的cTnⅠ。Ab1、Ab3 的效价分别为1 :80 万和1 :40 万,亲和力常数分别为1.62×109L/ mol、2.60×108 L/ mol。利用2 株单抗建立的鲁米诺化学发光酶免疫分析法检测范围为:6.25 ~ 400 ng/ ml。对30 份临床样本进行检测,阳性检出率为77.3%,阴性检出率为100%。结论:建立了可以检测以cTn玉单体、cTnⅠ-C 和cTnⅠ-T-C 复合物形式存在的cTnⅠ的鲁米诺化学发光酶免疫分析法,具有更高的实用性。
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关 键 词: | 人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ) 单克隆抗体 化学发光 |
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