miR-155过表达髓核细胞IncRNA表达谱芯片分析及对凋亡功能的影响

目的探讨在椎间盘退变过程中miR-155过表达髓核细胞IncRNA对凋亡功能的影响及机制。方法采用miR-155慢病毒载体过表达人椎间盘细胞髓核细胞,IncRNA芯片检测并通过基因组数据库(Ensemble)筛选出可能通过miR-155参与髓核细胞凋亡调控的IncRNA;将筛选出的GAS5 IncRNA转染髓核细胞,流式细胞术检测过表达GAS5 IncRNA后髓核细胞的凋亡情况;Western印迹法检测线粒体通路上两个关键凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3和B淋巴细胞瘤/白血病(Bcl)-2的表达情况。结果经IncRNA芯片分析共发现630个差异表达IncRNA,其中381个IncRNA表达上调、249个IncRNA表达下调。Ensemble显示,GAS5 IncRNA共包含有30个转录本,本次IncRNA芯片分析获得了13个转录本表达情况,均呈下降趋势,其中GAS5-016转录下调差异有统计学意义(Fc值≥1.5,P0.05)。GAS5 IncRNA过表达髓核细胞后,流式细胞术分析显示,GAS5 IncRNA过表达组髓核细胞早期凋亡率明显高于阴性对照组(P0.05);GAS5 IncRNA过表达组髓核细胞中Caspase-3蛋白表达水平明显高于阴性对照组,Bcl-2蛋白表达水平明显低于阴性对照组(均P0.05)。结论 IncRNA在人退变椎间盘髓核细胞凋亡中发挥重要作用,GAS5 IncRNA过表达可上调Caspase-3表达并下调Bcl-2表达同时激活细胞内的线粒体凋亡通路,促进髓核细胞凋亡;miR-155可能参与了GAS5 IncRNA调控髓核细胞凋亡的过程,但二者的相互调控机制仍需进一步研究。