重组腺病毒p21转染人毛乳头细胞的模型构建

目的确定重组腺病毒p21(rA d5-CDKN1A-1p2 shRNA)在人毛乳头细胞(HDPCs)转染中的转染效率及最佳滴度。方法采用携带绿色荧光蛋白(GFP)分子的重组腺病毒rA d5-CDKN1A-1p2 shRNA确定DPCs对腺病毒的敏感性;以不同感染系数(MOI)值稀释rA d5-CDKN1A转染DPCs并通过荧光显微镜及3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色检测每组细胞的转染效率及增殖效率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法证实rA d5-CDKN1A转入DPCs后p21基因沉默目的达到。结果rA d5-CDKN1A转染DPCs在MOI为100~500的转染效率均大于95%,当MOI为100、200和500时,各组转染效率升高不明显且差异无统计学意义(P>0.05);MOI=200及MOI=500组对DPCs细胞的增殖抑制效果明显(P<0.05);而MOI=100组对DPCs细胞增殖促进效果显著(P<0.05),MOI=25和MOI=50组对DPCs细胞增殖无明显作用;rA d5-CDKN1A转染后的DPCs较正常DPCs中p21基因的mRNA表达明显减弱。结论成功构建重组腺病毒转染DPCs的模型,并确立了最佳转染滴度:MOI=100,获得较高且稳定的转染效率。