| 电穿孔导入法在外源基因转染家兔精子的作用研究 |
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| 引用本文： | 黄伟民,赖良学,乔桂林,岳军明,安靓,王凯,付殿国,殷震,李进.电穿孔导入法在外源基因转染家兔精子的作用研究[J].解剖学研究,1999(1). |
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| 作者姓名： | 黄伟民 赖良学 乔桂林 岳军明 安靓 王凯 付殿国 殷震 李进 |
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| 作者单位： | 解放军第一军医大学组胚教研室 广州510510
(黄伟民，安靓)，解放军农牧大学军事医学研究所基因工程研究室 长春130062
(赖良学，乔桂林，岳军明，王凯，付殿国，殷震)，解放军第一军医大学组胚教研室 广州510510(李进) |
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| 基金项目： | 国家863课题资助,资助号:Z21-04-03 |
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| 摘 要： | <正> 目前建立转基因动物最常用的方法仍然是经典的受精卵显微注射法.但这一方法存在诸多的不足之外:所需的仪器设备价格昂贵;技术要求高;成功率低.电穿孔导入法,是通过高压电场使细胞膜通透性发生暂时性的可逆变化,从而使DNA分子进入细胞内的一种物理方法.目前已有一些穿孔导入法促使外源基因转染精子的报道,但由于各处实验室所使用的电击仪器不同,电击缓冲液及电击条件也不相同,因此,各实验结果的报道并不一致.我们用假阴道法采集家兔精子,经电击缓冲液洗涤3次,调整精子浓度至10~6个/ml.电击悬液总体积100ml,加入环状重组质粒pV-WAP-tPA(浓度20μg/ml).使用BAERON600型基因转移仪,设电击条件:周期10;脉冲数1000;脉冲宽度100;距离2.0mm;电压2000,4000,6000;脉冲时间500,1000,1500ms.另设电击悬液中不加质粒作
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