| 绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究 |
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| 引用本文： | 姜晓丹,徐如祥,张旺明,邹雨汐,蔡颖谦,杜谋选. 绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2003, 7(25): 3439-3441 |
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| 作者姓名： | 姜晓丹 徐如祥 张旺明 邹雨汐 蔡颖谦 杜谋选 |
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| 作者单位： | 解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所,广东省广州市,510282 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助(3027049)军队[01Z054]，广东省重大科技项目基金资助[粤科基办(2000)25],[粤财企(2001)367]~~ |
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| 摘 要： | 目的:探讨重组腺相关病毒包装绿荧光蛋白(rAAV-GFP)标记人骨髓源性神经干细胞(BM.NSCs)的可行性,为进一步行标记细胞移植实验研究奠定基础。方法:以成人自愿者的骨髓为研究对象,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞并用“Cytokine·神经干细胞培养基”诱导分化为神经干细胞,分化的细胞以免疫细胞化学鉴定。对接种生长的BM.NSCs(1×105～6/mL)以无血清培养基冲洗并重悬细胞,依最佳病毒感染指数(MOI)为105的标准计算、加入包装了GFP的rAAV病毒颗粒,连续培养12h(37℃,50mL/LCO2)以感染细胞;补加100g/L胎牛血清后,于神经干细胞培养基中继续细胞培养24h(37℃,50mL/LCO2)以上,荧光显微镜(OlympusIX70,Japan)追踪观察rAAV-GFP标记的BM.NSCs。结果:BM.NSCs于标记后1周内见不到GFP阳性表达;在标记10d后才出现有GFP阳性表达情况(平均每个200倍镜下视野可见到5～10个GFP阳性细胞),所标记的细胞在荧光显微镜下呈亮绿色;随着培养时间延长,BM.NSCs表达GFP也逐渐增强、阳性细胞数量逐渐增多,并可于1个月时最明显(标有GFP阳性的细胞可达BM.NSCs总数的60%),追踪观察到到2.5个月时亦未见衰减。结论:rAAV-GFP在人骨髓源性神经干细胞中的表达较迟,但呈渐强趋势;rAAV-GFP标记人骨髓源性神经干细胞具有可行性。
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| 关 键 词： | 干细胞 神经系统/细胞学 骨髓 细胞培养 荧光抗体技术 |
| 文章编号： | 1671-5926(2003)25-3439-03 |
| 修稿时间： | 2003-05-22 |
In Vitro experimental study on marking neural stem cells derived from human bone marrow with green fluorescence protein |
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| Xiao-Dan Jiang,Ru-Xiang Xu,Wang-Ming Zhang,Yu-Xi Zou,Ying-Qian Cai,Mo u-Xuan DuXiao-Dan Jiang,Ru-Xiang Xu,Wang-Ming Zhang,Yu-Xi Zou,Ying-Qian Cai,Mou-Xua n Du,Neuromedicine Institute of PLA,Zhujiang Hospital,First Military Medical Un iversity,Guangzhou ,Guangdong Province,China. In Vitro experimental study on marking neural stem cells derived from human bone marrow with green fluorescence protein[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2003, 7(25): 3439-3441 |
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| Authors: | Xiao-Dan Jiang Ru-Xiang Xu Wang-Ming Zhang Yu-Xi Zou Ying-Qian Cai Mo u-Xuan DuXiao-Dan Jiang Ru-Xiang Xu Wang-Ming Zhang Yu-Xi Zou Ying-Qian Cai Mou-Xua n Du Neuromedicine Institute of PLA Zhujiang Hospital First Military Medical Un iversity Guangzhou Guangdong Province China |
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| Affiliation: | Xiao-Dan Jiang,Ru-Xiang Xu,Wang-Ming Zhang,Yu-Xi Zou,Ying-Qian Cai,Mo u-Xuan DuXiao-Dan Jiang,Ru-Xiang Xu,Wang-Ming Zhang,Yu-Xi Zou,Ying-Qian Cai,Mou-Xua n Du,Neuromedicine Institute of PLA,Zhujiang Hospital,First Military Medical Un iversity,Guangzhou 510282,Guangdong Province,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rAAV-GFP expresses late in neural stem cells derived from human bo ne marrow but shows a gradual enhanced-trend.It is feasible for BM.NSCs to be marked with green fluorescence protein packed by rAAV-GFP. |
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