| 幽门螺杆菌47kDa微孔蛋白基因的克隆表达及特性鉴定 |
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| 引用本文： | 郝渭滨,邵世和,鞠小丽,李良菊,王华.幽门螺杆菌47kDa微孔蛋白基因的克隆表达及特性鉴定[J].中国人兽共患病杂志,2007,23(8):805-808,828. |
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| 作者姓名： | 郝渭滨 邵世和 鞠小丽 李良菊 王华 |
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| 作者单位： | 江苏常州市疾病预防控制中心，江苏大学医学技术学院病原生物学教研室 镇江212001，江苏大学医学技术学院病原生物学教研室，江苏大学医学技术学院病原生物学教研室，江苏大学医学技术学院病原生物学教研室，江苏大学医学技术学院病原生物学教研室，常州213003，镇江212001，镇江212001，镇江212001，镇江212001 |
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| 基金项目： | 江苏省科技厅科技计划;江苏大学高级人才项目 |
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| 摘 要： | 目的对人幽门螺杆菌(H.pylori)编码47kDa外膜微孔蛋白基因omp47克隆表达及特性鉴定,探索研制H.pylori疫苗的新途径。方法培养和收集H.pylori标准菌株NTTC11637及临床菌株,采用酚∶氯仿抽提、纯化基因组DNA。设计上下游引物,并以该基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增omp47基因片断。将目的基因和与克隆载体PGEM-T连接后,转化至E.coli DH5α及BL21,碱裂解提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定并进行序列分析。重组蛋白采用IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定、镍亲和层析纯化检测抗原活性。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片断为1284bp,编码427个氨基酸。与GenBank公布的H.pylori标准株26695、43504及J99序列比对,核苷酸同源性高达94%~96%,编码氨基酸同源性96%~99%。经SDS-PAGE检测,电泳图谱上显示一条相对分子量为47kda的新生蛋白带。Western blot检测表明重组蛋白有较好的抗原性。结论成功克隆了外膜微孔蛋白OMP47的编码基因,为H.pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。
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| 关 键 词： | 幽门螺杆菌 外膜微孔蛋白 原核表达原载体 蛋白纯化 |
| 文章编号： | 1002-2694（2007）08-0805-04 |
| 修稿时间： | 2007-01-112007-03-23 |
Cloning and characterization of 47KDa porin from Helicobacter pylori |
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| HAO Wei-bin,SHAO Shi-he,JU Xiao-li,LI Liang-ju,WANG Hua.Cloning and characterization of 47KDa porin from Helicobacter pylori[J].Chinese Journal of Zoonoses,2007,23(8):805-808,828. |
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| Authors: | HAO Wei-bin SHAO Shi-he JU Xiao-li LI Liang-ju WANG Hua |
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| Institution: | 1. Changzhou Centers of Disease Prevention and Control, Changzhou 213003; 2. Department of Microbiology, Medical Technology School of Jiangsu University ,Zhenjiang 212001 ,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Helicobacter pylori porin clone vector protein purification |
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